體內(nèi)DNA甲基化與癌癥的發(fā)生和發(fā)展有著密切的聯(lián)系。

DNA甲基化是一種表觀遺傳學(xué)機制，在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的作用下，將甲基基團（-CH3）共價地添加到DNA分子的特定堿基上，從而影響基因表達(dá)、基因組穩(wěn)定性、細(xì)胞分化和發(fā)育等生物學(xué)過程。DNA甲基化主要發(fā)生在CpG位點上，即DNA序列中的胞嘧啶（C）和鳥嘌呤（G）序列中的胞嘧啶上。

這種機制在正常細(xì)胞分裂和發(fā)育中起重要作用，然而，在癌癥形成過程中，DNA甲基化的異?？梢詫?dǎo)致關(guān)鍵基因的功能失調(diào)，導(dǎo)致基因沉默或基因組不穩(wěn)定，促進(jìn)腫瘤生長。因此，癌癥相關(guān)基因的異常甲基化可以用作早期檢測和風(fēng)險評估的標(biāo)志物。

圖1. DNA異常甲基化與癌癥的相關(guān)性

產(chǎn)品特色

• 亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化（bisulfite conversion）是目前用于檢測DNA甲基化狀態(tài)的標(biāo)準(zhǔn)方法之一。其原理‌是通過亞硫酸氫鹽處理DNA樣本，使得未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶則保持不變。因此，可以通過設(shè)計甲基化特異性探針來區(qū)分特定DNA靶標(biāo)位點上堿基的差異：如果目標(biāo)區(qū)域發(fā)生DNA甲基化，則探針能與模板進(jìn)行互補配對，釋放熒光信號；如果未發(fā)生甲基化，則無信號。

      可以說，甲基化檢測準(zhǔn)確與否，甲基化轉(zhuǎn)化是關(guān)鍵步驟之一，但在實際操作中存在相當(dāng)多的難點和挑戰(zhàn)：

• 轉(zhuǎn)化效率不高：如果只有一部分胞嘧啶會被轉(zhuǎn)化成尿嘧啶，會直接導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。

• DNA降解：如果轉(zhuǎn)化條件不當(dāng)，過程中DNA極易降解，影響到后續(xù)的實驗步驟，如PCR或測序。

• 試劑組分污染：轉(zhuǎn)化中殘留組分可能會污染樣品，影響到后續(xù)的實驗結(jié)果。

圖2. 甲基化轉(zhuǎn)化可區(qū)分目標(biāo)區(qū)域甲基化情況

•  經(jīng)過大量優(yōu)化驗證實驗，唯善生物隆重推出超快甲基化轉(zhuǎn)化試劑盒，采用獨特的配方和工藝流程，僅需10分鐘即可完成甲基化轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化率高達(dá)99.9%，同時能夠有效保護(hù)DNA樣本，精準(zhǔn)助力更快速、更準(zhǔn)確、更穩(wěn)定的DNA甲基化分析。

圖3. 唯善生物超快甲基化轉(zhuǎn)化試劑盒特點

產(chǎn)品簡介

試劑盒采用亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化液對核酸中未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，完成亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化修飾、提取、富集、純化步驟。其處理后的產(chǎn)物用于甲基化檢測。

包裝規(guī)格

32測試/盒（磁珠法），20測試/盒（純化柱法）

磁珠常溫運輸，長期保存建議置于 2℃-8℃，其余試劑置于室溫保存（注意避免陽光直射），有效期為 12 個月。詳見說明書。

樣本要求

純化后的DNA樣本，濃度區(qū)間為500pg - 2μg。

轉(zhuǎn)化效果

不同長度HBB片段經(jīng)3種轉(zhuǎn)化方法處理（M1-M3均為98℃轉(zhuǎn)化10min），結(jié)果顯示轉(zhuǎn)化效率高，PCR樣本濃度均為500ng基因組DNA。

圖4. 不同長度片段轉(zhuǎn)化膠圖

PCR檢測結(jié)果顯示98℃轉(zhuǎn)化10min即可達(dá)到高轉(zhuǎn)化率，經(jīng)計算轉(zhuǎn)化效率均>99.9%。

圖5. 超快甲基化轉(zhuǎn)化PCR檢測結(jié)果

對比原始方法（M0：80℃下轉(zhuǎn)化45min），超快轉(zhuǎn)化Ct值與其一致，且重復(fù)性好，證實了該試劑盒快速穩(wěn)定的性能，可滿足下游檢測。

圖6. 超快轉(zhuǎn)化與原始方法對比

請嚴(yán)格按照說明書設(shè)置轉(zhuǎn)化條件，轉(zhuǎn)化時間過長或過短均可能影響轉(zhuǎn)化結(jié)果。其他事項詳見說明書。